中华人民共和国国家标准 GB 22031—2010 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施食品安全国家标准 干酪及加工干酪制品中添加的柠檬酸盐的 测定 National food safety standard Determination of added citrate content in cheese and proce ssed cheese products GB 22031—2010 I 前 言 本标准代替GB/T 22031-2008 《干酪及加工干酪制品中添加的柠檬酸盐含量的测定 酶-比色法》。 本标准附录A 、附录B为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB/T 22031-2008 。 GB 22031—2010 1 食品安全国家标准 干酪及加工干酪制品中添加的柠檬酸盐的测定 1 范围 本标准规定了干酪及加工干酪制品中添加的柠檬酸盐含量（以柠檬酸计）的测定方法。 本标准适用于干酪及加工干酪制品中添加的柠檬酸盐含量的测定。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 原理 测定样品中总柠檬酸盐的含量，扣除原料带入样品中的柠檬酸盐的量（以 0.04倍乳糖换算），即为 样品中添加的柠檬酸盐含量。柠檬酸盐以柠檬酸计。 4 分析步骤 样品中的总柠檬酸盐的测定和含量计算按附录A 的规定执行。 样品中的乳糖的测定和含量计算按附录B 的规定执行。 5 分析结果的表述 样品中添加的柠檬酸盐含量按（1 ）式计算： wa=w c－rw i …………………………………………………………………………（1 ） 式中： wa——样品中添加的柠檬酸盐含量，以柠檬酸计，以质量分数（% ）表示； wc——样品中总柠檬酸含量，单位为质量分数（% ）； wi ——样品中乳糖含量，单位为质量分数（% ）； r ——原料乳清粉或乳粉中柠檬酸含量与乳糖含量的比率（柠檬酸/ 乳糖） （r = 0.04 ） 。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留至小数点后两位。 6 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 % 。 GB 22031—2010 2 附 录 A （规范性附录） 干酪及加工干酪制品中柠檬酸盐含量的酶法测定 A.1 范围 本标准适用于酶法测定干酪及加工干酪制品中的柠檬酸盐含量。 A.2 原理 柠檬酸盐裂解酶（CL ）将柠檬酸盐转化为草酰乙酸盐和乙酸盐，苹果酸脱氢酶（ MDH）和乳酸脱 氢酶（LDH ）在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH ）的存在下催化脱羧草酰乙酸盐以及脱羧产物丙 酮酸盐，分别转化成L- 苹果酸和L- 乳酸。NADH 在反应中被氧化成了NAD+。在340 nm 处测定样品溶液 中NADH 的吸光度差值，计算样品中柠檬酸盐的含量。 A.3 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。 A.3.1 三氯乙酸溶液（200 g/L ）:称取 20 g三氯乙酸（CCl 3COOH）溶于水中，混匀，并定容至 100 mL。 A.3.2 氢氧化钠溶液（200 g/L ）:称取20 g氢氧化钠（NaOH ） ，用水溶解后转移至100 mL 容量瓶中， 定容。充分混合。 A.3.3 氢氧化钠溶液（40 g/L ）:称取 4 g氢氧化钠（NaOH ） ，用水溶解后转移至100 mL 容量瓶中，定 容。充分混合。 A.3.4 氢氧化钠溶液（4 g/L ）:称取 0.4 g氢氧化钠（NaOH ） ，用水溶解后转移至100 mL 容量瓶中，定 容。充分混合。 A.3.5 氯化锌溶液（0.8 g/L ）:称取 0.8 g氯化锌（ ZnCl 2） ，用水溶解后转移至1000 mL 容量瓶中，定容。 充分混合。 A.3.6 缓冲液（pH 7.8 ）:称取 7.13 g双甘氨肽(H 2NCH 2CONHCH 2CO 2H)，溶解于70 mL 水中，转移至100 mL容量瓶中。用氢氧化钠溶液（ A.3.2）调节 pH至7.8，加入 10 mL氯化锌溶液（A.3.5 ）并定容至100 mL 。 充分混合。储存在0 ℃～ 4 ℃的冰箱中，此溶液可以保存四周。 A.3.7 碳酸氢钠溶液（4.0 g/L ）:称取 4.0 g碳酸氢钠（ NaHCO 3） ，用水溶解后转移至 1000 mL容量瓶中， 定容。充分混合。 A.3.8 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NADH）溶液:称取 50 mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐 （C 21H27N7O14P2Na2）和100 mg 碳酸氢钠（NaHCO 3） ，溶解于10 mL 水中。 A.3.9 硫酸铵溶液（422 g/L ）:称取 42.2 g硫酸铵 [(NH 4)2SO 4]，用水溶解后转移至100 mL 容量瓶中，定 容。充分混合。 A.3.10 苹果酸脱氢酶（MDH ）和乳酸脱氢酶（LDH ）悬浊液:用硫酸铵溶液（ A.3.9）分别溶解苹果 酸脱氢酶（猪心，EC 1.1.1.37 ）和乳酸脱氢酶（兔肉，EC 1.1.1.27 ） ，使苹果酸脱氢酶（MDH ）的活性 不低于600 IU/mL 和乳酸脱氢酶的活性不低于1400 IU/mL 。缓慢搅匀成悬浊液后，储存在0 ℃～4 ℃冰箱 中，此溶液可以保存一年。 A.3.11 柠檬酸盐裂解酶（CL ）溶液:用 0 ℃水溶解柠檬酸盐裂解酶（产气肠杆菌，EC 4.1.3.6） ，使柠 檬酸盐裂解酶的活性不低于40 IU/mL 。缓慢搅匀成悬浊液后，储存在0 ℃～4 ℃冰箱中，此溶液可以保 存一周；在-20 ℃冰箱中，可以保存四周。 A.3.12 柠檬酸标准溶液 （160 µg/mL ）:称取 175 mg一水柠檬酸 （C 6H8O7·H2O） ， 用水溶解后转移至1000 mL容量瓶中，定容。充分混合。