书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 １３０８７ — ２０２０ /G21 /G22 ＧＢ ／ Ｔ１３０８７ — １９９１ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻狊狅狋犺犻狅犮狔犪狀犪狋犲狊犻狀犳犲犲犱狊 ２０２０  ０７  ２１ /G2E /G2F ２０２１  ０２  ０１ /G30 /G31 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G2E /G2F书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ１３０８７ — １９９１ 《 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ１３０８７ — １９９１ 相比 ， 除编辑性修改外 ， 主要技术变化如下 ： ——— 删除了银量法 （ 见 １９９１ 年版的第二篇 ）； ——— 增加了方法的检出限和定量限 （ 见第 １ 章 ）； ——— 修改了方法的适用范围 （ 见第 １ 章 ， １９９１ 年版的第 １ 章 ）； ——— 修改了白芥子酶的制备方法 （ 见 ４．１０ ， １９９１ 年版的 ３．５ ）； ——— 修改了白芥子酶的用量 （ 见 ７．１ ， １９９１ 年版的 ６．１ ）； ——— 增加了异硫氰酸酯混合标准溶液的配制和应用 （ 见 ４．１２ 、 ４．１３ 、 ７．３ 和第 ８ 章 ）； ——— 修改了气相色谱测定条件 （ 见 ７．２ ， １９９１ 年版的 ６．２ ）； ——— 修改了测定结果计算公式 （ 见第 ８ 章 ， １９９１ 年版的第 ７ 章 ）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 四川威尔检测技术股份有限公司 、 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 、 通威股份有限公司 。 本标准主要起草人 ： 张凤枰 、 佟建明 、 张艳红 、 李德祥 、 杨发树 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１３０８７ — １９９１ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １３０８７ — ２０２０ 饲料中异硫氰酸酯的测定方法 １ 　 范围 本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法 。 本标准适用于配合饲料 、 浓缩饲料 、 精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定 。 本标准的检出限为 ２ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ５ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ５５２０ 　 粮油检验 　 发芽试验 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 　 动物饲料 　 试样的制备 ３ 　 原理 试样中的硫葡萄糖苷在 ｐＨ７．０ 缓冲液中 ， 在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯 、 丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯 ， 用二氯甲烷提取 ， 脱水 、 过滤后以气相色谱仪测定 ， 内标法定量 ， 结果以丙烯基异硫氰酸酯计 。 ４ 　 试剂或材料 除非另有规定 ， 仅使用分析纯试剂 。 ４ ． １ 　 水 ： ＧＢ ／ Ｔ６６８２ ， 一级 。 ４ ． ２ 　 二氯甲烷 。 ４ ． ３ 　 石油醚 （ 沸程 ３０℃ ～ ６０℃ ）。 ４ ． ４ 　 无水硫酸钠 。 ４ ． ５ 　 柠檬酸溶液 （ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确称取 ４．２０ｇ 柠檬酸 （ Ｃ ６ Ｈ ８ Ｏ ７ · Ｈ ２ Ｏ ） 溶解于水中 ， 用水稀释并定容至 ２００ｍＬ ， 混匀 。 临用现配 。 ４ ． ６ 　 磷酸氢二钠溶液 （ ０．２ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确称取 ２８．３９ｇ 无水磷酸氢二钠 （ Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ ） 溶解于水中 ， 用水稀释并定容至 １Ｌ ， 混匀 。 临用现配 。 ４ ． ７ 　 盐酸溶液 （ ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确移取 ０．９ｍＬ 浓盐酸 ， 用水稀释并定容至 １Ｌ ， 混匀 。 ４ ． ８ 　 氢氧化钠溶液 （ ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确称取 ０．４０ｇ 氢氧化钠加水溶解 ， 用水稀释并定容至 １Ｌ ， 混匀 。 ４ ． ９ 　 ｐＨ７．０ 缓冲溶液 ： 量取 １７６．５ｍＬ 柠檬酸溶液 （ ４．５ ） 于 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 用磷酸氢二钠溶液 （ ４．６ ） 稀释并定容至 １０００ｍＬ ， 混匀 ， 用盐酸溶液 （ ４．７ ） 或氢氧化钠溶液 （ ４．８ ） 调整 ｐＨ 至 ７．０ 。 临用现配 。 ４ ． １０ 　 白芥子酶 ： 称取 ５０ｇ 白芥 （ 犛犻狀犪狆犻狊犪犾犫犪 Ｌ． ） 种子 （ 按照 ＧＢ ／ Ｔ５５２０ 做发芽试验 ， ７２ｈ 内发芽率应大于 ８５％ ， 保存期不超过两年 ） 粉碎后 ， 置于 ５００ｍＬ 烧杯中 ， 加入 １００ｍＬ 石油醚 （ ４．３ ）， 搅拌 ２ｍｉｎ ， 静置 ， 弃去上层液体 ， 重复脱脂 １０ 次 ， 使脂肪含量低于 ２％ ， 置通风橱内使溶剂挥干 ， 然后再粉碎一次 ， １ 犌犅 ／ 犜 １３０８７ — ２０２０ ８０％ 通过 ０．２８ｍｍ 试验筛 ， 装在密闭容器中 ， 置于 －１８℃ 以下保存 ， 有效期为 ６ 个月 。 为保证白芥子酶活性 ， 制备过程中环境温度应保持在 ３０℃ 以下 ， 两次粉碎注意少量多次 ， 防止粉碎机过热 。 ４ ． １１ 　 丁基异硫氰酸酯内标溶液 （ ０．１ｍｇ ／ ｍＬ ）： 准确称取 ５０ｍｇ （ 精确至 ０．００００１ｇ ） 丁基异硫氰酸酯 ［ ＣＨ ３ （ ＣＨ ２ ） ３ ＮＣＳ ， ＣＡＳ 号 ： ５９２８２５ ， 纯度 ≥ ９９％ ］ 于 ５００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷溶解并定容 ， 混匀 ， 于 －１８℃ 以下保存 ， 有效期为 ３ 个月 。 ４ ． １２ 　 异硫氰酸酯混合标准溶液 （ １．０ｍｇ ／ ｍＬ ）： 分别准确称取 １０ｍｇ （ 精确至 ０．００００１ｇ ） 丙烯基异硫氰酸酯 ［ ＣＨ ２ ＝ＣＨＣＨ ２ ＮＣＳ ， ＣＡＳ 号 ： ５７０６７ ， 纯度 ≥ ９９．７％ ］、 丁烯基异硫氰酸酯 ［ ＣＨ ２ ＝ＣＨＣＨ ２ ＣＨ ２ ＮＣＳ ， ＣＡＳ 号 ： ３３８６９７８ ， 纯度 ≥ ９５．０％ ］、 戊烯基异硫氰酸酯 ［ ＣＨ ２ ＝ＣＨＣＨ ２ ＣＨ ２ ＣＨ ２ ＮＣＳ ， ＣＡＳ 号 ： １８０６０７９２ ， 纯度 ≥ ９５．０％ ］ 于 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用丁基异硫氰酸酯内标溶液 （ ４．１１ ） 溶解并定容 ， 混匀 ， 于 －１８℃ 以下保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ４ ． １３ 　 异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液 ： 精确移取适量异硫氰酸酯混合标准溶液 （ ４．１２ ） 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用丁基异硫氰酸酯内标溶液 （ ４．１１ ） 稀释定容配制成标准系列工作溶液 ， 丙烯基异硫氰酸酯 、 丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的浓度分别为 ０ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．００１ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．０２ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．０５ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．５ｍｇ ／ ｍＬ 、 １．０ｍｇ ／ ｍＬ 。 丁基异硫氰酸酯内标浓度均为 ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 。 临用现配 。 ４ ． １４ 　 定性滤纸 ： 快速 ， 内径 ７．０ｃｍ 。 ５ 　 仪器设备 ５ ． １ 　 气相色谱仪 ： 配有氢火焰检测器 （ ＦＩＤ ）。 ５ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．０１ｇ 、 ０．０００１ｇ 和 ０．００００１ｇ 。 ５ ． ３ 　 实验用样品粉碎机 。 ５ ． ４ 　 振荡器 ： 往复 ， 不低于 ２００ 次 ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ５ 　 离心机 ： 转速不低于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ６ 　 样品 按照 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 规定制备试样 ， 至少 ２００ｇ ， 粉碎使其全部过 ０．４２ｍｍ 分析筛 ， 混合均匀 ， 装入密闭容器中 ， 备用 。 ７ 　 试验步骤 ７ ． １ 　 试样溶液制备 平行做两份试验 。 称取约 ２．０ｇ （ 精确至 ０．０００１ｇ ） 试样置于 １００ｍＬ 具塞三角瓶中 ， 加入 ０．５ｇ 白芥子酶 （ ４．１０ ）、 ５．０ｍＬｐＨ７．０ 缓冲溶液 （ ４．９ ）、 １０ｍＬ 丁基异硫氰酸酯内标溶液 （ ４．１１ ）， 于室温下 ２００ 次 ／ ｍｉｎ 振荡提取 ２ｈ ， 将具塞三角瓶中内容物全部转入离心试管中 ， ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 取下层溶液 ， 用铺有 ２ｇ ～ ３ｇ 无水硫酸钠层的定性滤纸过滤 ， 滤液备用 。 ７ ． ２ 　 气相色谱参考条件 色谱柱 ： 聚乙二醇 （ ＦＦＡＰ ） 毛细管柱 ， 长 ３０ｍ ， 内径 ０．３２ｍｍ ， 膜厚 ０．２５ μ ｍ ， 或性能相当者 。 色谱柱温度 ： 起始温度 １００℃ ， 保持 １０ｍｉ