ICS13.060 CCSC51 中华人民共和国国家标准 GB/T18204.3—2025 代替GB/T18204.3—2013 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物指标 Examinationmethodsforpublicplaces— Part3:Airbornemicroorganismindicators 2025-05-30发布 2025-12-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 细菌总数 2 ………………………………………………………………………………………………… 5 真菌总数 4 ………………………………………………………………………………………………… 6 β-溶血性链球菌 7 ………………………………………………………………………………………… 7 嗜肺军团菌 9 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 现场采样检测布点要求 17 ……………………………………………………………… 参考文献 19 …………………………………………………………………………………………………… ⅠGB/T18204.3—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是GB/T18204《公共场所卫生检验方法》的第3部分。GB/T18204已经发布了以下部分: ———第1部分:物理性指标; ———第2部分:化学性指标; ———第3部分:空气微生物指标; ———第4部分:公共用品用具微生物指标; ———第5部分:集中空调通风系统; ———第6部分:卫生监测技术规范。 本文件代替GB/T18204.3—2013《公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物》,与 GB/T18204.3—2013相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了“范围”(见第1章,2013年版的第1章); b) 更改了“撞击法”“自然沉降法”的术语和定义(见3.5、3.6,2013年版的2.5、2.6); c) 增加了“细菌总数”样品的保存和运输、结果计算、质量控制(见4.1.4.4、4.1.6.1、4.1.7和 4.2.4.4、4.2.6.1、4.2.7); d) 增加了“真菌总数”样品的保存和运输、结果计算、质量控制(见5.1.4.4、5.1.6.1、5.1.7和 5.2.4.4、5.2.6.1、5.2.7); e) 增加了“β-溶血性链球菌”样品的保存和运输、革兰氏染色镜检、触媒试验等生化鉴定、结果计 算、质量控制(见6.4.4、6.5.3~6.5.5、6.6.1、6.7); f) 增加了“嗜肺军团菌”样品的保存和运输、生化鉴定、血清型鉴定、质量控制(见7.1.4.4、7.1.5.6、 7.1.5.7、7.1.6、7.1.7); g) 增加了“嗜肺军团菌”的荧光聚合酶链(PCR)快速检测法(见7.2)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家疾病预防控制局提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、江苏省疾病预防控制中心、 深圳市疾病预防控制中心、常州市疾病预防控制中心。 本文件主要起草人:姚孝元、唐宋、李霞、丁珵、丁震、周连、余淑苑、丁培、毛怡心、石晓路、谈立峰、 马恺。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2000年首次发布为GB/T18204.1—2000《公共场所空气微生物检验方法 细菌总数测定》; ———2013年第一次修订,标准编号改为GB/T18204.3—2013,代替GB/T18204.1—2000,部分代 替GB/T17220—1998《公共场所卫生监测技术规范》中空气微生物采样要求; ———本次为第二次修订。 ⅢGB/T18204.3—2025 引 言 GB/T18204《公共场所卫生检验方法》是推荐性国家标准,与GB37488《公共场所卫生指标及限值 要求》相配套使用,是开展公共场所卫生监测推荐遵循的标准检验方法。GB/T18204(所有部分)的发 布有利于规范公共场所相关的样品采集、现场和实验室检测,提升检测机构检测结果的精密度、准确度 和可比性,为保障公共场所卫生安全和人群健康提供重要支撑。本文件是GB/T18204的第3部分,本 次修订对GB37488中涉及空气微生物指标的检验方法进行了完善,补充了各项指标采样后的运输和 保存要求、结果计算、质量控制要求,增加了β-溶血性链球菌的生化鉴定步骤,补充了嗜肺军团菌的定 量检测方法和荧光PCR快速检测法,从而有针对性地解决前版标准中部分指标存在操作步骤不清、缺 乏质量控制等问题,提高检验方法的科学性、准确性和适用性。 GB/T18204由6个部分构成。 ———第1部分:物理性指标。目的在于提供公共场所中物理性指标的现场检测的基本原则和要求。 ———第2部分:化学性指标。目的在于提供公共场所中化学性指标的样品采集和实验室检测的基 本原则和要求。 ———第3部分:空气微生物指标。目的在于提供公共场所中空气微生物指标的样品采集和实验室 检测的基本原则和要求。 ———第4部分:公共用品用具微生物指标。目的在于提供公共场所中公共用品用具微生物指标的 样品采集和实验室检测的基本原则和要求。 ———第5部分:集中空调通风系统。目的在于提供公共场所中集中空调通风系统指标的样品采集 和实验室检测的基本原则和要求。 ———第6部分:卫生监测技术规范。目的在于规范公共场所卫生监测的频次与样本量、质量控制等 技术要求。 ⅣGB/T18204.3—2025 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物指标 1 范围 本文件描述了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与检 验方法。 本文件适用于公共场所中空气微生物指标的测定,其他场所参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 细菌总数 totalbacterialcount 在营养琼脂培养基上经36℃±1℃培养48h所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的 总数。 3.2 真菌总数 totalfungalcount 在沙氏琼脂培养基上经28℃±1℃、3d~5d培养所形成的菌落数。 3.3 β-溶血性链球菌 β-hemolyticstreptococcus 能产生溶血素,血平板上在菌落周围形成界限分明、完全透明的溶血环(β-型溶血)的化脓(或A 群)链球菌和无乳(或B群)链球菌。 [来源:GB4789.11—2014,2.2,有修改] 3.4 嗜肺军团菌 Legionellapneumophila 两端钝圆,有鞭毛,无芽孢和荚膜的革兰氏阴性杆菌,具有在含有L-半胱氨酸和三价铁盐缓冲液的 活性炭-酵母提取液培养基上生长的特性,经生化试验和血清学试验鉴定确认的一种具有致病性的军团 菌,是引起军团菌病的主要菌型。 [来源:GB/T40392—2021,3.2,有修改] 1GB/T18204.3—2025 3.5 撞击法 impactingmethod 采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过惯性撞击,从而将悬浮在空气中的微生物采集到采样介 质上的采样方法。 3.6 自然沉降法 naturalsinkingmethod 将培养基平板暴露在空气中,微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采样方法。 4 细菌总数 4.1 撞击法 4.1.1 原理 采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,将悬浮在空气中的微生物采 集到营养琼脂平板上,经36℃±1℃、48h培养后得到细菌菌落数。 4.1.2 仪器和耗材 本方法中使用的主要仪器和耗材如下: ———六级筛孔撞击式微生物采样器; ———高压蒸汽灭菌器; ———恒温培养箱:36℃±1℃; ———无菌平皿:直径为90mm; ———pH计或精密pH试纸。 4.1.3 营养琼脂培养基 4.1.3.1 成分 蛋白胨10.0g,牛肉浸膏3.0g,氯化钠5.0g,琼脂20.0g,纯水1000mL。也可采用符合 GB4789.28要求的成品培养基。纯水水质应符合GB/T6682三级水或以上的要求。 4.1.3.2 制法 将蛋白胨、牛肉浸膏、氯化钠溶于纯水中,校正pH为7.4±0.2,加入琼脂,121℃,15min高压灭 菌。待冷却到45℃~50℃时,以无菌操作每皿倾注15mL培养基于平皿中,冷却后制成平板备用。 4.1.4 采样 4.1.4.1 采样点:应符合附录A中A