ICS13.060 C51 中华人民共和国国家标准 GB/T18204.4—2013 代替GB/T18204.2~18204.8—2000,GB/T18204.11~18204.12—2000, 部分代替GB/T17220—1998 公 公共场所卫生检验方法 第4部分:公共用品用具微生物 Examinationmethodsforpublicplaces— Part4:Microorganismonasurfaceofpublicarticles 2013-12-31发布 2014-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 3 细菌总数平皿计数法 1 …………………………………………………………………………………… 4 大肠菌群多管发酵法 4 …………………………………………………………………………………… 5 金黄色葡萄球菌平皿鉴定法 6 …………………………………………………………………………… 6 真菌总数平皿计数法 8 …………………………………………………………………………………… 7 溶血性链球菌培养法 9 …………………………………………………………………………………… 附录A(规范性附录) 公共场所公共用品用具微生物采样方法 11 ……………………………………… ⅠGB/T18204.4—2013 前 言 GB/T18204《公共场所卫生检验方法》分为六个部分: ———第1部分:物理因素; ———第2部分:化学污染物; ———第3部分:空气微生物; ———第4部分:公共用品用具微生物; ———第5部分:集中空调通风系统; ———第6部分:卫生监测技术规范。 本部分为GB/T18204的第4部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分代替GB/T18204.2—2000《公共场所茶具微生物检验方法 细菌总数测定》、GB/T18204.3— 2000《公共场所茶具微生物检验方法 大肠菌群测定》、GB/T18204.4—2000《公共场所毛巾、床上卧具 微生物检验方法 细菌总数测定》、GB/T18204.5—2000《公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法 大肠菌群测定》、GB/T18204.6—2000《理发用具微生物检验方法 大肠菌群测定》、GB/T18204.7— 2000《理发用具微生物检验方法 金黄色葡萄球菌测定》、GB/T18204.8—2000《公共场所拖鞋微生物 检验方法 霉菌和酵母菌测定》。代替GB/T18204.11—2000《公共场所浴盆、脸(脚)盆微生物检验方 法 细菌总数测定》、GB/T18204.12—2000《公共场所浴盆、脸(脚)盆微生物检验方法 大肠菌群测 定》。部分代替GB/T17220—1998《公共场所卫生监测技术规范》中的公共用品用具采样要求。 本部分与GB/T18204.2~18204.8—2000、GB/T18204.11~18204.12—2000和GB/T17220— 1998相比,主要变化如下: ———对菌落计数公式进行了修改; ———增加了溶血性链球菌检验方法。 本部分由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本部分由中华人民共和国卫生部负责解释。 本部分负责起草单位:江苏省疾病预防控制中心。 本部分参加起草单位:南京市疾病预防控制中心。 本部分主要起草人:陈连生、沈贇、符晓梅、甄世祺、陈晓东、张秀珍、石利民。 自本部分实施之日起,GB/T18204.2~18204.8—2000、GB/T18204.11~18204.12—2000全部内 容和GB/T17220—1998中相应内容同时废止。 GB/T18204.2~18204.8—2000、GB/T18204.11~18204.12—2000的历次版本发布情况为: ———GB/T18204.2—2000; ———GB/T18204.3; ———GB/T18204.4; ———GB/T18204.5; ———GB/T18204.6; ———GB/T18204.7; ———GB/T18204.8; ———GB/T18204.11—2000; ———GB/T18204.12—2000。 GB/T17220—1998的历次版本发布情况为: ———GB/T17220—1998。 ⅢGB/T18204.4—2013 公共场所卫生检验方法 第4部分:公共用品用具微生物 1 范围 GB/T18204的本部分规定了公共场所公共用品用具细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄 球菌和溶血性链球菌的采样与测定方法。 本部分适用于公共场所内公共用品用具细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄葡萄球菌以及溶血性 链球菌的测定,其他场所可参照执行。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 细菌总数 totalbacterialcount 公共用品用具经过采样处理,在营养琼脂培养基上经35℃~37℃、48h培养所生长发育的嗜中温 性需氧和兼性厌氧菌落的总数。 2.2 大肠菌群 coliforms 在37℃、24h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 2.3 金黄色葡萄球菌 staphylococcusaureus 在BairdParker培养基或血平板培养基上生长良好,分解甘露醇产酸,血浆凝固酶阳性的革兰氏阳 性葡萄状球菌。 2.4 真菌总数 totalfungicount 在孟加拉红或沙氏琼脂培养基上经25℃~28℃、3d~7d培养所形成菌落的总数。 2.5 溶血性链球菌 streptococcushemolyticus 属于链球菌属,为革兰氏阳性菌,分解葡萄糖,产酸不产气,血平板上产生溶血圈。 3 细菌总数平皿计数法 3.1 培养基与试剂 3.1.1 生理盐水成分: 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000mL 制法:称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,分装到试管内,每管10mL,121℃高压灭菌 15min。 1GB/T18204.4—2013 3.1.2 营养琼脂成分: 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 10g~20g 蒸馏水 1000mL 制法:将上述成分混合后,加热溶解,调整pH为7.4~7.6,分装于玻璃容器内,经103.43kPa (121℃,15lb)灭菌20min,储存于冷暗处备用。 3.2 仪器和设备 3.2.1 高压蒸汽灭菌器。 3.2.2 干热灭菌箱。 3.2.3 恒温培养箱:36℃±1℃。 3.2.4 冰箱。 3.2.5 电炉或微波炉。 3.2.6 天平:感量0.1g。 3.2.7 涡旋混合器。 3.2.8 无菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管等。 3.2.9 灭菌棉拭子。 3.2.10 灭菌剪刀。 3.2.11 pH计或精密pH试纸。 3.2.12 放大镜或(和)菌落计数器。 3.3 检验步骤 3.3.1 采样方法见附录A。 3.3.2 样品的稀释:将放有采样后棉拭子的试管充分振摇,此液为1∶10的样品匀液。用1mL无菌吸 管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL生理盐水稀释液(3.1.1)的无菌 试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均 匀,制成1∶100的样品匀液。按同法制备10倍系列稀释样品匀液,每递增稀释1次,换用1次1mL无 菌吸管或吸头。 3.3.3 样品的接种:根据对样品污染状况的估计,选择1个~2个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍 递增稀释时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入两 个无菌平皿作空白对照。 3.3.4 样品的培养:及时将15mL~20mL冷却至45℃~50℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。琼脂凝固后,将平板翻转, 36℃±1℃培养48h±2h。 3.4 菌落计数 3.4.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量(CFU)。 3.4.2 选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的 平均数。 3.4.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释 2GB/T18204.4—2013