ICS13.080.10 B10 中华人民共和国国家标准 GB/T32737—2016 土壤硝态氮的测定 紫外分光光度法 Determinationofnitratenitrogeninsoil—Ultravioletspectrophotometrymethod 2016-08-29发布 2017-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国土壤质量标准化技术委员会(SAC/TC404)归口。 本标准起草单位:中国科学院南京土壤研究所、中国科学院亚热带农业生态研究所、中国科学院西 双版纳热带植物园、中国科学院遗传与发育生物学研究所、中国科学院东北地理与农业生态研究所、中 国科学院沈阳应用生态研究所、中国科学院植物研究所、江苏省标准化研究院。 本标准主要起草人:孙波、宋歌、张玉铭、陈安磊、付昀、韩勇、宗海宏、乔云发、张岩、何念鹏、郑重。 ⅠGB/T32737—2016 土壤硝态氮的测定 紫外分光光度法 1 范围 本标准规定了运用紫外分光光度法测定土壤浸出液中硝态氮的原理、试剂、仪器、分析步骤、结果计 算与表示、精密度、质量保证和控制等。 本标准适用于土壤中硝态氮的测定。本方法对土壤硝态氮的检出限为0.5mg/kg,定量限为 1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 HJ634 土壤 氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法 NY/T52 土壤水分测定法 NY/T1377 土壤中pH值的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 吸光度 absorbance 光线通过土壤浸出液前的入射光强度与该光线通过土壤浸出液后的透射光强度比值的以10为底 的对数。 3.2 f值 fvalue 土壤浸出液中的有机物在220nm波长处的吸光度和在275nm波长处的吸光度的比值。 4 原理 利用土壤浸出液中硝酸根离子在220nm波长附近有明显吸收且吸光度大小与硝酸根离子浓度成 正比的特性,对硝态氮含量进行定量测定。利用溶解的有机物在220nm和275nm波长处均有吸收, 而硝酸根离子在275nm波长处没有吸收的特性,测定土壤浸出液在275nm处的吸光度,乘以一个校 正因数(f值)以消除有机质吸收220nm波长而造成的干扰。 5 试剂 除非另有规定,在分析中仅使用分析纯试剂,所用水应符合GB/T6682中三级水的要求。 1GB/T32737—2016 5.1 氯化钾浸提液[c(KCl)=1mol/L] 准确称取74.55g氯化钾置于烧杯中,加入约400mL水溶解。溶解后转移到1000mL容量瓶中 定容,摇匀。 5.2 硝态氮标准储备液[ρ(N)=1000mg/L] 精确称取7.2182g经(110±5)℃烘干2h的硝酸钾置于烧杯中,加入约50mL水溶解。溶解后转 移到1000mL容量瓶中定容,摇匀,于0℃~4℃冰箱内保存。 5.3 硝态氮标准中间液[ρ(N)=100mg/L] 吸取硝态氮标准储备液(5.2)10.0mL于100mL容量瓶中定容,摇匀。临用时配制。 6 仪器 6.1 恒温往复式振荡机 满足(220±20)r/min的振荡频率和(20±5)mm的振幅。 6.2 离心机 转速3000r/min以上,配有100mL聚乙烯离心管。 6.3 紫外分光光度计 配有10mm光程的石英比色皿。 7 分析步骤 7.1 试液的制备 7.1.1 制备 称取约40g(精确到0.01g)新鲜土壤样品于500mL螺口聚乙烯瓶中,加入200mL氯化钾浸提液 (5.1),旋紧瓶盖,置于恒温往复式振荡机(6.1)中,(25±5)℃条件下以(220±20)r/min的频率振荡1h。 转移约60mL悬浊液于100mL聚乙烯离心管中,在3000r/min的转速下离心10min。将约50mL 上清液转移至50mL聚乙烯瓶中,待测。 7.1.2 贮存 新鲜土壤样品的处理和贮存,以及样品试液的贮存按照HJ634的规定进行。 7.1.3 预处理 出现下列情况时需要对试液进行预处理: ———土壤样品试液与氯化钾浸提液对比,有明显色差时(试液多呈现黄色调),处理方法参见附录A 中A.1; ———采集自长期淹水的环境下的土壤样品,按HJ634规定的方法测定亚硝态氮浓度高于0.1mg/L 时,处理方法参见A.2; ———采集自盐碱化地区的土壤样品,按NY/T1377规定的方法测定土壤pH值高于7.5时,处理 方法参见A.3。 2GB/T32737—2016 7.2 空白试验 加200mL氯化钾浸提液于500mL聚乙烯瓶中,按照与7.1相同的试剂和步骤进行制备,每批样 品应制备2个以上空白溶液。 7.3 标准曲线 吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL硝态氮标准中间液(5.3)于100mL 容量瓶中,用氯化钾浸提液定容,摇匀后得到浓度分别为0.00mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、 3.00mg/L、4.00mg/L的硝态氮标准工作液。 用光程长10mm石英比色皿,于220nm和275nm波长处,以氯化钾浸提液为参比溶液,在紫外 分光光度计(6.3)上逐个测定硝态氮标准工作液的吸光度,计算出校正吸光度。 校正吸光度按式(1)计算: A=A220-2.23×A275 …………………………(1) 式中: A ———校正吸光度; A220———220nm波长处的吸光度; A275———275nm波长处的吸光度; 2.23———f值,是对多种类型土壤进行实验室测定得到的经验性校正因数,测定方法参见附录B。 将校正吸光度作为纵坐标,对应的硝态氮浓度为横坐标,绘制标准曲线。 7.4 测定 用光程长10mm石英比色皿,在220nm和275nm波长处,以氯化钾浸提液为参比溶液,在紫外 分光光度计上测定吸光度,测定顺序为先测空白溶液,再测样品试液。计算出校正吸光度,从标准曲线 上查出土壤浸出液中的硝态氮含量。 8 结果计算与表示 土壤硝态氮含量以质量分数wN计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(2)计算: wN=(ρN-ρ0)×R …………………………(2) 式中: ρN———从校准曲线上查得土壤样品试液的硝态氮浓度,单位为毫克每升(mg/L); ρ0———从校准曲线上查得空白试液的硝态氮浓度,单位为毫克每升(mg/L); R———试样体积(包括浸提液体积与土壤中水分的体积)与烘干土的比例系数,单位为毫升每克 (mL/g);按照式(3)~式(5)进行计算。 R=R1+R2 …………………………(3) R1=V m×1+wW 100æ èçö ø÷ …………………………(4) R2=wW dW×100…………………………(5) 式中: R1———浸提液体积与烘干土的比例系数,单位为毫升每克(mL/g); R2———土壤水分体积与烘干土的比例系数,单位为毫升每克(mL/g); V———浸提液体积,单位为毫升(mL); m———称取的新鲜土壤样品质量,单位为克(g); 3GB/T32737—2016 wW———以烘干土计的土壤水分的质量分数(%),测定方法应符合NY/T52的规定; dW———实验室所处温度下水的密度,单位为克每立方厘米(g/cm3),取1.00g/cm3。 当土壤硝态氮含量的测定结果小于1mg/kg时,保留两位有效数字;当测定结果大于或等于1mg/kg 时,保留三位有效数字。 9 精密度 9.1 重复性 在同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按相同的测试方法,并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r),超过重复性限(r)的情况不 超过5%,重复性限(r)按式(6)计算: r=0.0554×m …………………………(6) 式中: m———两次测定值的平均值,单位为毫克每千克(mg/kg)。 关于重复性条款的实验室测试结果以及统计数据参见附录C,式(6)为表C.1中平均值与重复性限 的线性拟合方程。 9.2 再现性 在不同的实验室,由不同的操作者使用不同的设备,按相同的测试方法,对同一被测对象相互独立 进行测试获得的两个独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R),超过再现性限(R)的情况不超过 5%,再现性限(R)按式(7)计算: R=0.1201×m …………………………(7) 式中: m———两个测定值的平均值,单位为毫克每千克(mg/kg)。 关于再现性条款的实验室测试结果以及统计数据参见附录C,式(7)为表C.1中平均值与再现性限 的线性拟合方程。 10 质量保证和控制 10.1 空白试验 每批样品应做2个空白试验,测试结果应低于方法检出限。 10.2 平行试验 每批样品应测定10%的平行样品,平行双样测定结果的绝对差值应满足重复性条款(9.1)的规定。 10.3 回收试验 每批样品应测定10%的加标样品,加标量为样品硝态氮含量的0.5~2倍,回收率应在90%~ 110%之间。 10.4 校准曲线 校准曲线使用线性拟合,判定系数应大于或等于0.9990。每批样品中应插入一个校准曲线中间点 浓度的标准工作溶液进行测定,其测定结果与校准曲线该点浓度的相对差值应小于或等于