ICS 71.100.01;87.060.10 G 55 中华人民共和国国家标准 GB/T 37280—2019 荧光增白剂产品中微生物的测定 Determination of microorganisms in fluorescent brighteners product 2020-02-01实施 2019-03-25发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T37280—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国石油和化学工业联合会提出 本标准由全国染料标准化技术委员会（SAC/TC134)归口。 本标准起草单位：浙江传化华洋化工有限公司、佛山市顺德区德美瓦克有机硅有限公司、中国化工 经济技术发展中心、沈阳化工研究院有限公司、国家染料质量监督检验中心。 GB/T37280—2019 荧光增白剂产品中微生物的测定 1范围 本标准规定了荧光增白剂产品中菌落总数和霉菌的测定方法。 本标准适用于荧光增白剂产品中菌落总数和霉菌的测定 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法（ISO3696：1987,MOD) GB/T8170—2008数值修约规则与极限数值的表示和判定 3实验室基本要求 3.1环境 3.1.1实验室环境不应影响检验结果的准确性。 3.1.2实验室的工作区域应与办公室区域明显分开。 3.1.3实验室工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要，实验室布局应采用单方向工作流 程，霉菌和一般细菌的培养场所应分开，避免交叉污染。 3.1.4实验室内环境的温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求。 3.1.5 一般样品检验应在洁净区域（包括超净工作台或洁净实验室）进行，洁净区域应有明显的标示。 3.1.6病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室进行 3.2人员 3.2.1检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施 检验。 3.2.2检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。 3.2.3检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。 3.2.4检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证自身安全。 3.2.5 有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及辨色的实验。 4 仪器和设备 4.1 分析天平，感量0.001g。 4.2无菌锥形瓶， 4.3 3无菌平皿：直径9cm。 1 GB/T37280—2019 4.4 无菌刻度吸管：10mL、2mL、1mL。 4.5 无菌试管。 4.6 无菌量筒。 4.7 pH计或精密pH试纸。 4.8 高压灭菌锅。 4.9 均质器。 4.10 恒温培养箱。 4.11 放大镜或显微镜。 5 培养基和试剂 5.1 实验室用水 实验室用水应符合GB/T6682一2008中二级水的要求。 5.2 菌落总数测定用培养基 5.2.1成分 胰蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）。成分为： 胰蛋白陈 15 g 5g 植物蛋白陈 氯化钠 5 g 琼脂 12 g 水 1 000 mL 5.2.2制法 将上述成分加于水中，煮沸溶解，调节pH=7.3士0.2。分装于试管或锥形瓶，121℃高压灭菌 15 min。 5.3 霉菌总数测定用培养基 5.3.1成分 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。成分为： 马铃薯浸出粉 10 g 葡萄糖 20 g 琼脂 13 g 氯霉素 0.1 g 水 1 000 mL 5.3.2制法 称取各组分溶于1000mL水中，煮沸至溶解，分装后经121℃高压灭菌15min备用。 2 GB/T37280—2019 5.4无菌生理盐水 5.4.1成分 氯化钠 8.5 g 水 1 000 mL 5.4.2制法 称取8.5g氯化钠溶于1000mL水中，121℃高压灭菌15min。 6操作步骤 6.1样品匀液制备 6.1.1固体和半固体样品 称取25g样品置于盛有225mL生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min~ 2min，制成1：10的样品匀液 6.1.2液体样品 以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌 玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 6.210倍稀释液制备 用1mL无菌吸管吸取1：10样品匀液（6.1)1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL生理盐水的无菌试 制成1：100的样品匀液。 继续上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或 吸头。 6.3培养 根据对样品污染状况的估计，选择2个或3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），用无 液加人两个无菌平皿内作空白对照。 根据测定要求，及时将15mL～20mL冷却至46℃的菌落总数测定用培养基（5.2）或霉菌总数测 定用培养基（5.2)（可放置于46℃土1℃恒温水浴箱中保温）倾注于各平血，并转动平皿使其混合均匀。 待琼脂凝固后，将平板翻转，测定菌落总数需要在37℃士1℃培养48h士2h，测定霉菌需要在28℃士 6.4菌落计数 6.4.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或显微镜观察，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以 菌落形成单位（colony-formingunits，CFU)表示。 6.4.2如果空白平板有菌落生长，则此次检测结果无效，应重新进行检测。 3.