ICS13.300 CCSA80 中华人民共和国国家标准 GB/T21751—2025 代替GB/T21751—2008 化学品 哺乳动物精原细胞染色体畸变 试验方法 Chemicals—Testmethodofmammalianspermatogonialchromosomeaberration 2025-10-05发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21751—2008《化学品 哺乳动物精原细胞染色体畸变试验方法》,与 GB/T21751—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 更改了适用范围的表述(见第1章,2008年版的第1章); b) 增加了“非整倍体”“着丝粒”“染色体多样性”“染色体断裂剂”“遗传毒性”等术语和定义(见第 3章); c) 增加了“实验室能力的验证”内容(见4.2); d) 更改了“动物选择”“动物房和饲养条件”“动物准备”和“受试物准备”的内容(见4.3,2008年版 的3.2); e) 更改了“溶剂和赋形剂”(见4.4.1,2008年版的3.3.1),增加了常用和首选的溶剂或赋形剂名称 (见4.4.1); f) 更改了一水合环磷酰胺的英文名称和丙烯酰胺单体的中文名称(见表1,2008年版的3.3.2); g) 增加了“阴性对照”内容(见4.4.3); h) 更改了“操作步骤”部分内容,对动物数量、染毒程序、剂量水平的选择、染毒途径做了具体规定 (见4.5,2008年版的3.4),更改了所需计数的中期分裂相细胞数量(见4.5.7.1,2008年版的 3.4.7),并增加了对实验动物的观察(见4.5.5); i) 增加了“质量保证与质量控制”内容(见5.2); j) 增加了“结果的评价和解释”内容(见5.3); k)更改了试验报告的内容要求(见第6章,2008年版的4.3)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、福建医科大学、北京汇智泰康医 药技术有限公司。 本文件主要起草人:张林媛、李煌元、陈宵、李斌、程秀荣、杜克贺、赵振超。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T21751—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21751—2025 引 言 哺乳动物体内精原细胞染色体畸变试验的目的是鉴定能导致哺乳动物精原细胞染色体结构畸变的 化学物质,而不是检测染色体数目异常。此外,尽管不同物种间可能存在差异,但体内代谢、药代动力学 和DNA修复过程中的各种因素都很活跃,会对反应产生影响,因此,此试验还适用于评估遗传毒性。 本文件检测精原生殖细胞分裂过程中的染色体结构畸变(包括染色体型和染色单体型),从而预测 能诱导这些生殖细胞中可遗传突变的可能性。 本文件通常采用啮齿类动物。细胞遗传学研究中,有经典的方法可以在啮齿类动物睾丸中生成精 原细胞有丝分裂和精母细胞减数分裂的中期相。根据染色体的形态识别有丝分裂和减数分裂中期相。 该项体内细胞遗传学试验检测精原细胞有丝分裂中的染色体结构畸变。其他靶细胞不是本文件的观察 对象。 为了检测精原细胞的染色单体型畸变,需检测染毒后细胞的第一次有丝分裂,以免这些畸变在随后 的细胞分裂中转变为染色体型畸变。通过对处于减数分裂终变期———分裂中期Ⅰ相和中期Ⅱ相染色体 结构畸变的分析,可以从染毒后的精母细胞获得更多的信息。 睾丸中存在多代精原细胞,它们对化学品染毒后的敏感性各不相同。因此,检测的畸变代表了经化 学品处理过的精原细胞群的综合反应。睾丸中大多数有丝分裂的细胞是B型精原细胞,其细胞周期约 为26h。 如果有证据表明受试物或其代谢产物不能到达睾丸,则不宜使用本文件。 ⅡGB/T21751—2025 化学品 哺乳动物精原细胞染色体畸变 试验方法 1 范围 本文件确立了化学品哺乳动物精原细胞染色体畸变试验的试验基本原则,规定了规定程序、数据与 报告的内容要求,描述了试验方法。 本文件适用于测试化学品对哺乳动物精原细胞的遗传毒性。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB14925 实验动物 环境及设施 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 染色单体型畸变 chromatid-typeaberration 单个染色单体断裂或染色单体间断裂和重接的染色体结构损伤。 3.2 染色体型畸变 chromosome-typeaberration 两个染色单体在相同位点断裂或断裂重接的染色体结构损伤。 3.3 裂隙 gap 小于染色单体宽度并伴有染色单体极小错位的不着色的损伤。 3.4 数目畸变 numericalaberration 染色体数目出现不同于所用细胞的正常染色体数目的改变。 3.5 结构畸变 structuralaberration 发生在细胞分化中期的染色体结构出现的改变。 注:如染色体结构缺失、碎片、内交换或互换等。结构畸变通过显微镜进行观察。 3.6 非整倍体 aneuploidy 一条或多条染色体与正常的二倍体(或单倍体)染色体数目的偏差。 1GB/T21751—2025 注:不包括整套染色体(多倍体)。 3.7 着丝粒 centromere 在细胞分裂时与纺锤体纤维相连,使姊妹染色体能有序地运动到子细胞的两极的染色体上的一个 区域。 3.8 染色体多样性 chromosomediversity 染色体形状和大小的变异。 注:如具有中央着丝粒的染色体和近端着丝粒染色体等染色体的形状变异。 3.9 染色体断裂剂 clastogen 在细胞群或生物体中引起染色体结构畸变的任何物质。 3.10 遗传毒性 genetoxicity 包括所有类型的DNA或染色体损伤的总称。 注:包括断裂、缺失、加合、核苷酸修饰和连接、重排、突变、染色体畸变和非整倍体。并不是所有类型的遗传毒性效 应都会导致突变或稳定的染色体损伤。 3.11 有丝分裂指数 mitoticindex;MI 在细胞群中观察到的有丝分裂中期相细胞数除以总细胞数的比值。 注:有丝分裂指数是细胞群体增殖程度的标志。 3.12 有丝分裂 mitosis 细胞核的分裂。 注:通常分为前期、前中期、中期、后期和末期。 3.13 致突变 mutagenicity 基因中DNA碱基对序列或染色体结构(染色体畸变)发生可遗传的变化。 3.14 最大耐受剂量 maximumtolerateddose;MTD 在研究的持续期间,能引起轻微毒性反应的剂量。 注1:轻微毒性反应包括异常行为或反应、轻微体重下降或造血系统细胞毒性等。 注2:最大耐受剂量不会导致动物死亡或使动物遭受痛苦而不得不实施安乐死。 3.15 最高剂量 thehighestdose 能够使动物产生明显毒性但不引起死亡或严重痛苦的中毒反应的剂量。 注:或规定为引起精原细胞毒性的剂量。例如在最高剂量下,会引起精原细胞有丝分裂至第一次和第二次减数分 裂中期相的比例不超过50%的降低。 4 试验方法 4.1 试验基本原则 动物通过适当的暴露途径接触受试物,并在染毒后的适当时间实施安乐死。在安乐死之前,用细胞 2GB/T21751—2025 分裂中期相阻断剂(如秋水仙素和秋水酰胺)处理动物,然后制备精原细胞染色体标本并染色,分析中期 分裂相细胞的染色体畸变。 4.2 实验室能力的验证 本试验的能力验证应通过阳性对照物质(包括弱反应)处理的精原细胞重现染色体结构畸变频率的 预期结果,并获得与已经发表的文献中对照数据可接受范围一致的阴性对照频率,或者与实验室历史对 照一致的数据来建立。 4.3 实验动物和饲养环境 4.3.1 动物选择 应采用实验室常用品系的健康初成年动物。首选雄性小鼠。但在科学合理的情况下,可使用其他 合适的雄性哺乳动物,并允许该试验与其他试验一起进行。应在报告中提供使用啮齿动物以外物种的 科学的理由。 4.3.2 动物房和饲养条件 对于啮齿动物,合适的动物房温度应为20℃~26℃,相对湿度为30%~70%,人工照明12h亮12 h暗。喂饲常规的实验室饲料,自由饮水。如果采用喂饲染毒法,应根据需要选择饲料,以确保受试物 能均匀地在其中混合。动物可单独饲养,也可同性别同笼饲养(每笼不超过5只),宜在有坚固地面的笼 内饲养并有适当的环境丰容。 4.3.3 动物准备 应使用健康初成年雄性动物(染毒开始时8周龄~12周龄),并随机分配到对照组和染毒组。每只 动物都采用一种人道的、微创的方法进行识别(如戴耳环、打标签、微芯片或生物特征识别,但不能剪耳 朵或脚趾)。在试验开始前,动物应提前适应实验室环境至少5d。尽量减少笼子摆放方式可能产生的 影响。避免阳性对照与受试物交叉污染。在试验开始时,动物个体之间体重差异应不超过平均体 重±20%。 4.3.4 受试物准备 在给动物染毒之前,固体受试物应溶解或悬浮在适当的溶剂或赋形剂中,或混合在饲料或饮用水 中。液体受试物可以直接染毒或稀释后染毒。对于吸入暴露,可根据受试物的物理化学性质,以气体、 蒸气或固体/液体气溶