ICS13.300 CCSA80 中华人民共和国国家标准 GB/T21765—2025 代替GB/T21765—2008 化学品 亚慢性吸入毒性试验方法 Chemicals—Testmethodofsubchronicinhalationtoxicity 2025-10-05发布 2026-02-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21765—2008《化学品 亚慢性吸入毒性试验方法》,与GB/T21765—2008相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了本文件检测化学品的范围(见第1章,2008年版的第1章); ———增加了缩略语(见第4章); ———增加了实验动物的饲养环境中使用口鼻方式染毒时和全身暴露方式染毒时饲料和饮水的要求 (见6.2.3); ———增加了染毒浓度的设计依据,即限量浓度和剂量预实验(见6.5、6.6); ———更改了染毒的设计,增加了卫星组,根据化学品性质分为试验方案A和试验方案B(见6.7.2、 附录A和附录B,2008年版的4.4); ———更改了临床观察为实验动物观察(见6.8,2008年版的4.7); ———增加了支气管肺泡灌洗液检测(见6.9.3); ———增加了肺脏负荷(见6.9.4); ———更改了病理学检查改为大体病理学检查和脏器系数、组织病理学检查、肺功能(见6.9.5、 6.9.6、6.9.7,2008年版的4.9); ———更改了试验数据和报告部分的内容(见7.1、7.2,2008年版的第5章)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本文件起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、华北理工大学、大连大学附属新 华医院。 本文件主要起草人:张艳淑、王伟轩、师凡、李斌、陈宵、肖经纬、张意、李吉航。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2008年首次发布为GB/T21765—2008; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T21765—2025 引 言 亚慢性吸入毒性试验主要是评估气体、挥发性物质、气溶胶/微粒等受试物的毒性特征,从而评估环 境中暴露人群的风险,识别和评估人类居住、消费、交通等特定环境的风险。 由于评估化学品种类增加和监管工作的不断变化、动物伦理和福利需求变化,及时对毒性测试方法 进行修订。本次修订的主要原因是满足纳米材料在内的颗粒气溶胶的毒性测试需求。本次修订后的测 试方法旨在通过亚慢性持续时间(90d)的吸入染毒,充分表征受试物的毒性,并为定量吸入风险评估提 供可靠的数据。 ⅡGB/T21765—2025 化学品 亚慢性吸入毒性试验方法 1 范围 本文件规定了化学品亚慢性吸入毒性试验方法的试验基本原则、试验方法、试验数据和报告。 本文件适用于检测化学品(包括纳米材料)的亚慢性吸入毒性。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB14925 实验动物 环境及设施 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 亚慢性吸入毒性 subchronicinhalationtoxicity 在实验动物连续(约相当于其生命周期的1/10)重复吸入受试物所发生的有害效应。 3.2 清除动力学 eliminationkinetics 化学物在体内被清除的方式和速率。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BAL:支气管肺泡灌洗(BronchoalveolarLavage) BALF:支气管肺泡灌洗液(BronchoalveolarLavageFluid) BMC:基准浓度(Benchmarkconcentration) GSD:几何标准差(GeometricStandardDeviation) LOAEC:观察到有害作用最低浓度(LowestObservedAdverseEffectsConcentration) MMAD:质量中值空气动力学直径(MassMedianAerodynamicDiameter) NOAEC:未观察到有害作用浓度(NoObservedAdverseEffectsConcentration) PEO:暴露后观察期(Post-ExposureObservation) 5 试验基本原则 5.1 实验动物分别在90d内每天吸入不同浓度的受试物,每天暴露6h。宜设有3组或3组以上的浓 度组,并设阴性对照组(滤过空气)和/或溶剂对照组,每组雌、雄各5只动物。在染毒期间,每天观察动 1GB/T21765—2025 物行为以监测毒性效应。试验期间死亡的动物和试验结束时处死的动物,进行有害效应观察和检测,包 括大体解剖、BALF分析和组织病理学检查。一般左肺用于组织病理学检查,右肺用于BALF分析。 如果受试物颗粒可溶性差,并可能在肺部沉积并滞留时,进行肺负荷的检测。 5.2 充分参照受试物的历史数据(急性吸入毒性试验数据),基于动物福利等原则,避免开展不必要的 动物测试,具体如下。 a) 在开展正式试验之前,收集受试物的所有可用信息,尽量减少动物使用,避免重复研究。受试 物的信息包括测试化学品属性、化学结构、物理化学性质;任何体外或体内毒性测试的结果,预 期用途和人类暴露的潜在可能性,可用的定量结构-活性关系(QSAR)数据、结构相关化学品 的毒理学数据。 b) 如果受试物为腐蚀性或刺激性的化学品,可测试其稀释液,以获得受试物的毒性状况。 c) 如果动物在测试过程中明显处于病危状态、表现出严重且持续痛苦,这些实验动物实施安 乐死。 6 试验方法 6.1 受试物 试验前收集受试物的以下信息: a) 受试物是气体、挥发性化学物还是气溶胶/颗粒性物质; b) 名称和CAS号; c) 受试物的纯度(杂质和含量); d) 液态物:饱和蒸气压、沸点; e) 气溶胶/颗粒物:粒度、形状和密度分布、肺负荷资料; f) 闪点; g) 爆炸性。 6.2 实验动物和饲养环境 6.2.1 动物的选择 应使用初成年、健康的啮齿类实验动物和实验室常用品系。首选物种为大鼠,如选用其他物种应说 明理由。雌性动物应为未生产和未孕动物。 6.2.2 动物准备 在随机分组当天,动物应为7周龄~9周龄的初成年大鼠。动物的体重差异不应超过同性别平均 体重的20%。动物应随机分组并进行标记,以便于个体识别。试验开始前动物应在实验动物房内进行 至少5d的检疫观察和适应。 6.2.3 饲养环境 按照GB14925要求,动物实验室温度应控制在20℃~26℃,相对湿度为30%~70%,人工光照 时间应为12h明、12h暗。动物按性别和浓度分笼饲养,每笼的动物数以不影响对每只动物的观察为 宜。当使用口鼻方式染毒时,束缚动物的装置不应给实验动物带来不必要的压力。动物染毒前,宜在吸 入染毒装置中适应一段时间,避免由于环境改变使动物体温或呼吸频率发生改变等。应用全身暴露方 式进行染毒时,实验动物宜单独饲养,以防止它们通过舔食皮毛再次暴露于受试物。应保证动物在染毒 柜内不拥挤,并能最大程度地接触空气中的受试物。 2GB/T21765—2025 6.2.4 吸入染毒装置 慢性吸入毒性试验应在动式吸入染毒设备中进行试验。根据受试物的物理特性和试验目的选择染 毒装置,要求染毒装置内氧气的体积分数不低于19%、二氧化碳的体积分数不超过1%,相对湿度应保 持在30%~70%,受试物在空气中为均匀分布。如果设备是染毒柜,除了上述要求外还应维持每小时 12次~15次换气。染毒装置应配有控制测定空气中受试物浓度的动式吸入染毒系统。染毒设备应维 持轻微的负压,以免受试物从染毒柜逸出。若受试物具有潜在的爆炸性,在实验过程的浓度设计应谨 慎,避免达到爆炸的浓度。 6.3 染毒方式 依据受试物性质选择染毒方式。受试物为液体或固体气溶胶以及可能凝结成气溶胶的蒸气时,宜 采用口鼻的染毒方式。有特殊目的试验可应用全身暴露方式染毒,并在试验报告中说明采用该染毒方 式的理由。在全身暴露染毒时,为确保染毒柜中气体相对稳定,试验动物的总体积不应超过染毒室容积 的5%。 6.4 暴露条件监测 6.4.1 染毒过程中应监测并记录染毒室中的气体流速、温度和湿度。染毒期间应持续监测并至少每小 时记录染毒室的空气流量。如果进行实时受试物的浓度监测,空气流量的测量为每天一次。染毒期间 每个浓度组每周至少进行一次气溶胶分散度的测定。受试物气溶胶颗粒的MMAD小于或等于2μm, GSD应在1.0~3.0。在染毒期间,应进行粒径分析,宜染毒每2h至少应测定1次粒径。 6.4.2 在对染毒柜中受试物浓度进行动态监测过程中,液态或固体气溶胶在单个染毒室内的浓度应在 平均浓度的±20%的范围,气体或蒸气在平均浓度的±10%范围。对于不同的暴露水平,每个暴露日应 至少测量3次染毒室的受试物浓度。特殊条件下,应每个暴露日至少检测1次。对于由气体/蒸气和气 溶胶组成的非常复杂的混合物,宜选择每个相(气体/蒸气和气溶胶)的至少一种指示物质(分析物)或者 受试物配方中的主要活性物质进行检测。当测试化学品是混合物(如制剂)时,应检测整个制剂的浓度。 同时,应记录染毒装置内受试物的计算(设计)浓度和实际浓度及染毒柜中受试物浓度达